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        原代細胞培養
        PCR

        時間:2021-03-05 瀏覽:3509次

        PCR

        一、實驗原理

        PCR 全稱聚合酶鏈式反應(英文:Polymerase chain reaction),是利用DNA雙鏈復制的原理,在生物體外大量擴增特定DNA片段的分子生物學技術,其特點是可以以微量的DNA為模板,快速擴增得到大量拷貝。原理是基于DNA 半保留復制與堿基互補配對原則,是在體外模擬DNA的天然復制過程,主要由‘變性-退火-延伸’這三個基本步驟構成,變性:DNA雙鏈在高溫條件(95℃)下解旋形成單鏈;退火:降低溫度可使引物結合到單鏈DNA上,DNA聚合酶結合到引物上;延伸:DNA 聚合酶在其最適反應溫度(72℃)開始沿著DNA5'-3' 方向合成互補鏈。隨著PCR 的進行,生成的DNA本身將作為模板,從而啟動鏈式反應,原始DNA模板被指數擴增。

         二、實驗試劑

        Taq酶,M-MLV逆轉錄酶,dNTPs, DEPC處理水,雙蒸水

         三、實驗儀器

        電泳儀, PCR儀,高速離心機,移液器,電泳儀,電泳槽,紫外分析儀

         四、操作步驟

        1cDNA的合成

        逆轉錄體系的組成:

        2PCR擴增特異性片段

        25ul PCR體系的組成:

        五、實驗注意事項

        整個操作始終注意避免RNA酶的污染;

        PCR反應靈敏,注意避免試劑污染;

        酶易失活,整個操作注意在冰上進行。

        設立對照:陽性對照:陽性模板,陰性對照:陰性模板,試劑對照:除模板外的所有組分。




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        實驗培訓文章潤色       動物模型裸鼠成瘤

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        麟美生物主營業務包括實驗動物模型建立、分子生物學、載體構建、細胞轉染、基因治療實驗、細胞功能驗證、基因敲出/入、原代培養、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立等多項科研技術服務,并建立了涵蓋實驗設計、項目實施、結果整理、數據分析及策略咨詢等一站式的科研服務體系并提供全方位科研方案。


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