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        原代細胞培養
        HE染色

        時間:2021-03-04 瀏覽:15200次

        HE染色(hematoxylin-eosin staining

        HE 染色:又稱蘇木素-伊紅染色法,其中蘇木素是Hematoxylin,簡稱H,伊紅是Eosin, 簡 稱E,HE 染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。 這種方法對組織細胞的各種成分都可著色,經過 HE 染色,細胞核被蘇木素染成藍紫色,細胞質被伊紅染色呈粉紅色。蘇木素是堿性染料,藍紫色,可以使細胞核等著色。被蘇木素著色的結構本身為酸性,具有嗜堿性(Basophilic)。伊紅是酸性染料,粉紅色??梢詫⒋蠖鄶导毎募毎|染成紅色。被伊紅著色的結構本身為堿性,具有嗜酸性(Acidophilic)。

        HE染色法過程:

        1、脫蠟

        1.1從溫箱中取出烤干的切片,立即投入二甲苯中脫蠟510min(可在二瓶中進行),脫蠟時間長短取決于蠟是不徹底溶解。氣溫低可延長時間,氣溫高可適當縮短時間或在溫箱中加速脫蠟。

        1.2移入無水酒精(100%)(二瓶),2min。

        1.3移入90%酒精中(二瓶),2min。

        1.4移入80%酒精中(二瓶),2min。

        1.5移入70%酒精中,2min。

        1.6移入水中,洗去酒精,23min。

        1.7移入蒸餾水中,2min。

        2、染色

        2.1移入蘇木素中,浸染5min,一般以稍深染為宜。

        2.2移入水中,洗去蘇木素和浮色,1min。

        2.3移入分化液(1%鹽酸酒精),分化幾秒至30秒鐘, 使切片褪色至淡蘭紅色即可。分化的作用,可使細胞漿蘭色脫去,而細胞核更加清晰,鮮麗,分化不足時,胞漿帶蘭,胞核過染,分化過度時,胞核太淡,難以辯認,可再退回蘇木素染液, 延長一定時間。

        2.4移入流水中,洗滌3060min,使組織呈鮮蘭色或天蘭色(蘭化)。

        2.5移入伊紅液中,浸染25min,如著染緩慢 , 可在伊紅液中加入冰醋酸 (100ml伊紅液加12滴冰醋酸)以助染。

        2.6移入水中,洗去伊紅浮液,并用紗布擦凈玻片上的多余染料。

        3、脫水

        3.1吸去玻片上的水分后多入80%酒精中,(二瓶)脫水,12min, 如在酒精中褪色很快時,可迅速移入90%酒精或返回伊紅液中復染。

        3.2移入90%酒精中(二瓶)脫水,24min。

        3.3移入無水酒精(100%酒精)(二瓶)徹底脫水,48min。

        4、透明

        4.1移入二甲苯Ⅰ中透明35min。

        4.2移入二甲苯Ⅱ中透明510min。

        5、封固

        用樹膠封固,先從二甲苯Ⅱ中取出切片,將組織外圍的二甲苯迅速擦去,在滴上一滴樹膠于組織片上,然后取干凈的蓋玻片,仔細加在封固劑上,慢慢壓平, 使蓋片位置適中。切片封固后,放在溫箱中烤干,或平置涼干后裝盒。

        注意事項

        切片脫水透明切片經HE染色后,要徹底脫水透明,才能用中性樹膠封蓋。如果脫水不徹底,封片后呈白色霧狀,鏡下觀察模糊不清,且容易褪色。切片1-2級無水乙醇脫水,也可使用石炭酸二甲苯進行脫水。石炭酸有較強脫水能力,但長時間可使切片脫色,因此要經過多次二甲苯以使石碳酸完全除去。

        結果展示:

        結果:細胞核呈藍色,細胞質,肌纖維,膠原纖維和紅細胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和 細菌可呈藍色或紫藍色。

        粘蟲Mythimna separata 腸道HE染色(200X)



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