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原代細胞制備與培養
將動物各種組織從機體中取出,經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA) 或機械方法處理,分散成單細胞,在合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖,麟美生物提原代培養服務供給您高質量的原代細胞株。原代培養的基本過程包括取材、培養材料的制備、接種及培養等步驟。原代培養的方法很多,基本和最常用的是組織塊培養法和分離細胞法。
基本操作過程
1)、用培養液濕潤所取組織材料,并用鋒利的眼科剪將附在其上的脂肪和結締組織去除干凈。再用平衡液(PBS)或Hanks液漂洗;用鋒利的眼科彎剪將組織塊剪成小塊;再用PBS或Hanks液漂洗多次,直至液體不渾濁、無油滴、清亮為止。
2)、用濕潤的吸管吸取切碎的組織塊,清清吹到培養瓶皿中,并將其按一定間距均勻放在培養瓶底壁上,量不要過多,要將組織塊切面貼在培養瓶底壁上;
3)、將培養瓶翻轉,使瓶底朝上,在種植了組織塊一側的對側面加足培養液,勿使組織塊與培養液接觸,塞緊瓶塞;
4)、將種植了組織塊的一側朝上,靜置于37℃培養箱中;待組織塊貼壁1h到3h后翻瓶,使貼壁的組織塊浸沒與培養液中,靜置; 5)、每隔2到3天更換一次培養液,或者根據培養瓶種顏色的變化確定換液時間。
提供凍存或處于對數生長期的細胞株一瓶(細胞培養條件,圖片)。
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