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        原代細胞培養
        細胞克隆形成實驗

        時間:2021-03-04 瀏覽:2809次

        細胞克隆形成實驗

        實驗原理

        細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞??寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀。


        基本步驟

        1.取對數生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養液中備用。

        2.將細胞懸液作梯度倍數稀釋,每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預溫培養液的皿中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養箱中培養23周。

        3.經常觀察,當培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘。然后去固定液,加適量GIMSA應用染色液染1030分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。

        4.將平皿倒置并疊加一張帶網格的透明膠片,用肉眼直接計數克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。最后計算克隆形成率??寺⌒纬陕?=(克隆數/接種細胞數)×100%

        平板克隆形成試驗方法簡單,適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好,不能有細胞團,接種密度不能過大。

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        實驗培訓文章潤色       動物模型裸鼠成瘤

        臨床檢測科研轉化       病理染色分子互作
        麟美生物主營業務包括實驗動物模型建立、分子生物學、載體構建、細胞轉染、基因治療實驗、細胞功能驗證、基因敲出/入、原代培養、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立等多項科研技術服務,并建立了涵蓋實驗設計、項目實施、結果整理、數據分析及策略咨詢等一站式的科研服務體系并提供全方位科研方案。

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