
時間:2019-03-08 瀏覽:2759次
細胞劃痕實驗
一、實驗簡介
細胞劃痕(修復)法是一種簡捷的測定細胞遷移運動與修復能力的方法,類似體外傷口愈合模型。在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量頭或其他硬物在細胞生長的中央區域劃線,去除中央的細胞,然后繼續培養細胞至設定時間(采用無血清或低血清(<2%)排除細胞增殖的影響),取出培養板,觀察周邊細胞是否生長(修復)至中央劃痕區,以此判斷細胞的生長遷移能力。通常設定正常對照組與實驗組,實驗組中添加某些處理因素或藥物、外源性基因等,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力,判斷比較各組細胞的遷移與修復能力。
二、細胞劃痕實驗步驟
(1) 先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻的劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
(2) 在孔中加入約5×105個細胞,培養細胞至匯合度達到90%以上。
(3) 用頭比著直尺,垂直于背后的橫線劃痕。
(4) PBS洗細胞3次,去除劃下的細胞,加入無血清培養基。
(5) 放入37℃ 5% CO2培養箱培養。按0,12,24,48h時間點取樣,100倍鏡下拍照。如果細胞遷移(修復)能力較強,需相應縮短觀察時間間隔。
(6) 結果分析:對不同時間點不同處理分組的劃痕間距進行分析。
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